Egy-sejt PCR beállítása sertésen preimplantációs genetikai diagnózis céljából
DOI:
https://doi.org/10.17205/SZIE.AWETH.2018.1.015Kulcsszavak:
PGD, ivarmeghatározás, egy-sejt PCRAbsztrakt
Az utóbbi évtizedben az új reprodukciós technikák fejlesztésének és alkalmazásának hatására jelentősen megemelkedett a sertés ágazat termelékenysége. A preimplantációs genetikai diagnózis (PGD) és embriótranszfer segítségével meghatározott ivarú utódokból álló almok állíthatók elő. Az embriókon végzett biopszia révén kinyert sejtek ivarának meghatározása után a kívánt nemű embriók ültethetők recipiens állatokba. Kísérleteinkben egy sertés PGD módszert kívántunk kifejleszteni in vitro létrehozott embriókból embrióbiopsziával kinyert sejteken.
Munkánk során az ivarspecifikus PCR-hez pozitív kontrollként a mindkét nemre jellemző sertés mitokondriális 12S rRNS génszekvenciát választottuk, míg az Y kromoszóma kimutatására a sertés hím-specifikus ismétlődő szekvenciát alkalmaztuk a duplex PCR során. Vágóhídról származó petefészkekből kinyert petesejteket használtunk a PCR beállításához, hogy elérjük az embrió ivarának meghatározáshoz szükséges detektálási érzékenységet (6pg/μl DNS). A keletkezett PCR termékek 2%-os agaróz gélen futtatva jól elkülöníthetőek: nőstény esetében egy, hímek esetében két sáv detektálható. A sikeres beállítást követően a PGD módszereként in vitro fertilizációval előállított 8-sejtes embriókat biopsziáztunk és egy-sejt PCR segítségével megállapítottuk a nemüket.
Hivatkozások
Bredbacka, P. (2001): Progress on methods of gene detection in preimplantation embryos. Theriogenology, 55: 23–34. https://doi.org/10.1016/S0093-691X(00)00443-X
Fu, Q., Zhang, M., Qin, W. S., Lu, Y. Q., Zheng, H. Y., Meng, B., Lu, S. S., Lu, K. H. (2007): Cloning the swamp buffalo SRY gene for embryo sexing with multiplex-nested PCR. Theriogenology, 68: 1211–1218. https://doi.org/10.1016/j.theriogenology.2007.07.007
Habib, A. S. S., Christian,V., Mehdi,S., Dominic,G., Éric,F., Béatrice, M., Jacques,C., Patrick,B., Claude,R. (2014): Impact of whole-genome amplification on the reliability of pre-transfer cattle embryo breeding value estimates. BMC Genomics, 15:889. https://doi.org/10.1186/1471-2164-15-889
Johnson, L. A., Rath, D., Vazquez, J. M., Maxwell, W. M. C., Dobrinsky, J. R. (2005): Preselection of sex of offspring in swine for production:current status of the process and its application. Theriogenology, 63: 615–624. https://doi.org/10.1016/j.theriogenology.2004.09.035
Kahraman, S., Beyazyürek, Ç., Avni Taç, H., Pirkevi, C., Cetinkaya, M., Gülüm , N. (2015): Recent advances in preimplantation genetic diagnosis. Advances in Genomics and Genetics, 5: 189–203. https://doi.org/10.2147/AGG.S53422
Pozzi, A., Previtali, C., Lukaj, A.,Galli, A., Bongioni, G., Puglisi, R. (2014): High-resolution melt analysis does not reveal mutagenic risk in sexed sperm and in vitro-derived bovine embryos. Animal Genetics, 45: 473–478. https://doi.org/10.1111/age.12159
Tavares, K. C. S., Carneiro, I. S., Rios, D. B., Feltrin, C., Ribeiro, A. K. C., Gaudêncio-Neto, S., Martins, L. T., Aguiar, L. H., Lazzarotto, C. R., Calderón, C. E. M., Lopes, F. E. M., Teixeir, L. P. R., Bertolini, M., Bertolini, L. R. (2016): A fast and simple method for the polymerase chain reaction-based sexing of livestock embryos. Genet. Mol. Res. 15 (1) https://doi.org/10.4238/gmr.15017476
Torner, E., Bussalleu, E., Briza, M. D., Gutierrez-Adan, A., Bonet S. (2013): Sex determination of porcine embryos using a newdeveloped duplex polymerase chain reaction procedure based on the amplification of repetitive sequences. Reproduction, Fertility and Development, 25: 417–425. https://doi.org/10.1071/RD12033
Letöltések
Megjelent
Folyóirat szám
Rovat
License
Copyright (c) 2018 Fábián Renáta, Pintér Tímea, Magyar Andrea, Bodó Szilárd
This work is licensed under a Creative Commons Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 International License.
