Sertés fibroblaszt alapú génbank
DOI:
https://doi.org/10.17205/SZIE.AWETH.2023.1.126Kulcsszavak:
génbank, sertés fibroblaszt, sejttenyésztésAbsztrakt
Manapság egyre nagyobb kihívást jelent a genetikai diverzitás megőrzése. Az afrikai sertéspestis (ASP) súlyosan tizedeli Európa vaddisznó és házisertés állományait. A hazai őshonos és a köztenyésztésből egyre inkább kiszoruló hagyományos magyar fajták kifejezetten veszélyeztetettek egy ilyen járvánnyal szemben, alacsonyabb egyedszámuk miatt.
Választásunk ezen fajták közül a magyar nagyfehér sertésfajtán belül egy archaikusabb típust képviselő core populáció egyedeire esett. Kísérleteink során a keszthelyi magyar nagyfehér törzstenyészet 25 kocájától származó fülcsipkét dolgoztunk fel. A fülcsipkékből létrehozott mintákat Knockout DMEMw/F-12 alapú médiumban tenyésztettük, és 37,5 oC-on, 5% CO2 tartalom mellett inkubáltuk 15 napon keresztül. A tenyésztés végén, a sejttenyészeteket mélyhűtöttük egyedi vonalkóddal ellátott fagyasztó csövekben. A lefagyasztott sejteket -150oC fokon tároljuk a mintákból származó DNS és RNS mintákkal együtt.
Mind mélyhűtés előtt, mind mélyhűtés után elvégeztük a sejttenyészetek életképesség vizsgálatát Arthur fluoreszcens sejt számoló géppel. Átlagosan 97%-os életképes sejtet kaptunk. Ezek mellett megkezdtük a minták immunfestéssel való vizsgálatát is. Sikeresen ki tudtuk mutatni a titin és actin jelenlétét a mintákban.
A kutatócsoportunk által alkalmazott protokollok lehetőséget nyújtanak a sertés fibroblaszt tenyészetek egyszerűbb izolálására és tenyésztésére. Emellett más távlati lehetőséget is megnyithatnak, mint például az iPS tenyészetek létrehozását, amik a sertés anatómiai sajátosságai miatt alapjául szolgálhatnak majd orvosi kutatásokban alkalmazható modell rendszerek létrehozására.
Hivatkozások
Kubota, C., Yamakuchi, H., Todoroki, J., Mizoshita, K., Tabara, N., Barber, M., Xiangzhong, Y. (2000): Six cloned calves produced from adult fibroblast cells after long-term culture. Proc. Natl. Acad. Sci., 97. 990–995. https://doi.org/10.1073/pnas.97.3.990
Komuro, T. (1990): Re-evaluation of fibroblasts and fibroblast-like cells. Anat. Embryol. (Berl). 182. 103–112. https://doi.org/10.1007/BF00174011
Van Linthout, S., Miteva, K., Tschöpe, C. (2014): Crosstalk between fibroblasts and inflammatory cells. Cardiovasc. Res., 102. 258–269. https://doi.org/10.1093/cvr/cvu062
Ruan, W.M., Han, J.Y., Li, P., Cao, S., An, Y., Lim, B., Li, N. (2011): A novel strategy to derive iPS cells from porcine fibroblasts. Sci. China Life Sci., 54. 553–559. https://doi.org/10.1007/s11427-011-4179-5
Letöltések
Megjelent
Folyóirat szám
Rovat
License
Copyright (c) 2023 Urbán Martin, Ivan Carl Dela Rosa, Ecker András, Benedek Zsuzsanna, Nagy Szabolcs Tamás, Bodó Szilárd, Gócza Elen
This work is licensed under a Creative Commons Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 International License.