Az aminosavak elválasztása és meghatározása ioncserés oszlopkromatográfiával, oszlop utáni származékképzés alkalmazásával
Kulcsszavak:
ioncserés oszlopkromatográfia, IEC, nagyhatékonyságú folyadék-kromatográfia, HPLC, aminosav-meghatározásAbsztrakt
Tiszta fehérjék, élelmiszerek, biológia eredetű folyadékok aminosav-összetételének meghatározására a legtökéletesebb módszer még mindig az ioncserés oszlop-kromatográfia (IEC). Biológiai eredetű folyadékok szabadaminosav-tartalmának meghatározása lítium pufferek alkalmazásával könnyen megvalósítható. IEC esetén a szennyező anyagok többsége gyorsan keresztül jut az oszlopon, mielőtt az aminosavak szétválasztása megkezdődne, ami megnöveli a módszer hatékonyságát. A minta-előkészítés ideje az oszlop előtti származékképzést alkalmazókhoz képest minimális, és az 33 aminosavak kimutatása OPA-val vagy ninhidrinnel specifikus az egyes aminosavakra. Újabban egy off-line minta-előkészítést alkalmaznak anioncserélő kromatográfiával és amperometriás detektálással kombinálva, melynek segítségével a szénhidrátok zavaró hatása kiküszöbölhető. A legfontosabb problémák továbbra is a fehérjehidrolízis, a biológiai eredetű minták fehérjementesítése, és a metionin, a cisztein és a triptofán részleges elbomlása a minta-előkészítés során. Jelenleg a hagyományos IEC oszlop utáni ninhidrines származékképzés tűnik a legjobbnak tiszta fehérjékre, élelmiszerekre és komplex keverékekre is, bár néhány esetben a nagyhatékonyságú folyadékkromatográfia is hasonlóan jónak bizonyult.
Hivatkozások
Amino acids in animal nutrition. A compendium of recent reviews and reports (2002). Szerk.: Bologa U. L., Degussa 1–558.
Amino acid analyser AAA 400. (2002). User manual INGOS.
Amino acid analysis Handbook and application (1982). LKB Biochrom.
Andersen, T. T. (1994). Practical amino acid analysis. ABRF News, 1–5.
Ashworth, R. B. (1987). J. Assoc. Off. Anal. Chem., 70(2), 248–252. https://doi.org/10.1093/jaoac/70.2.248
Belitz, H. D. Grosch, W. (1999). Food chemistry. Springer, 1–992. https://doi.org/10.1007/978-3-662-07281-3
Le Boucher, J., Charret, C., Coudray-Lucas, C., Giboudeau, J., Cynober, L., (1997). Amino acid determination in biological fluids by antrered ion-exchange chromatography: performance of Hitachi L-8500A. Chinical Chemistry, 43(8), 1421–1428. https://doi.org/10.1093/clinchem/43.8.1421
Cooper, C., Packer, N., Williams, K. (2001). Amino acids protocols. Humana Press, 1–265. https://doi.org/10.1385/1592590470
Davey, J. F., Ersser, R. S. (1990). Amino acid analysis of physiological fluids by high-performance liquid chromatography with phenylisothiocyanate derivatization and comparison with ion-exchange chromatography. J. Chromatography, 528. 9–23. https://doi.org/10.1016/S0378-4347(00)82358-0
Davies, R. L., Bagient, D. R., M. S. Levitt, M. S., Mollah, Y., Rayner, C. J., Frensham, A. B. (1992). Accuracy and precision in amino acid analysis. J. Sci. Food Agric., 59(4), 423–436. https://doi.org/10.1002/jsfa.2740590402
Ding, Y., Yu, H., Mou, S. (2003). Off-line elimination of carbohydrates for amino acid analysis of samples with high carbohydrate content by ion-exchange chromatography. J. Chromatography, 997(1–2), 155–160. https://doi.org/10.1016/S0021-9673(03)00548-X
Friedman, M. (1975). Protein nutrition quality of foods and feeds. Assay methods-biological, biochemical and chemical. Marcel Dekker 1–626.
Grunau, J. A., Swiader, M. (1992). Chromatography of 99 amino acids and other ninhydrin-reactive compounds in the Pickering lithium gradient system. J. Chromatography, 594(1–2), 136–171. https://doi.org/10.1016/0021-9673(92)80326-P
Hanko, V. P., Heckenberg, A., Rohrer, J. S. (2004). J. Biomolecular Tecniques, 15. 317–324.
Hanko, V. P., Rohrer, J. S. (2002). Direct determination of tryptophan using high-performance anion-exchange chromatography with integrated pulsed amperometric detection. Analytical Biochemistry, 308(2), 204–209. https://doi.org/10.1016/S0003-2697(02)00215-4
Holm, D. J., Peck, H. (1998). Analytical Biochemistry. Longman 91–168.
Jandik, P., Cheng, J., Jensen, D., Manz, S., Avdalovic, N. (2001). Simplified in-line sample preparation for amino acid analysis in carbohydrate containing samples. J. Chromatography, 758(2), 189–196. https://doi.org/10.1016/S0378-4347(01)00179-7
Moore, S., Stein, W. H. (1951). Chomatography of amino acids on sulfonated polystyrene resins. J. Biol. Chem., 192. 663–681. https://doi.org/10.1016/S0021-9258(19)77791-6
Moore, S., Stein, W. H. (1963). Chomatographic determination on amino acids by the use of automatic recording equipment. Methods Enzimol., 6. 819–831. https://doi.org/10.1016/0076-6879(63)06257-1
Feed evaluation. Principles and practice. Szerk.: Moughan, P. J., Verstegen, M. W. A., Visser-Reyneveld, M. I. (2000). Wageningen Pers. 1–290.
Parvy, P., Bardet, J., Rabier, D., Gasquet, M., Kamoun, P. (1993). Clin. Chem., 39(9), 1831–1836. https://doi.org/10.1093/clinchem/39.9.1831
Pickering, M. V. (1981). U.S. Patent 4. 274. 833.
Pickering, M. V. (1989). Ion-exchange chromatography of free amino acids. LC-GC 6. 484–490.
Ravindran, G., Bryden, W. L. (2005). Food Chemistry ,89(2), 309–314. https://doi.org/10.1016/j.foodchem.2004.05.035
Sarwar, G., Botting, H. G. (1993). J. Chromatography. 544. 9–23.
Schwarz, E. L., Roberts, W. L., Pasquali, M. (2004). Clinica Chimica Acta, 343(1–2), 204–209. https://doi.org/10.1016/j.cccn.2004.01.015
Teik, Ng. L., Wong, Y. D., Francis, T., Andersen, G. H. (1991). Ion-exchange chromatography for physiological fluid amino acid analysis. Nutr. Biochem. 2(12), 671–697. https://doi.org/10.1016/0955-2863(91)90066-E
Walker, J. M. (2002). The protein protocols Handbook. Humana Press, 1–1146 https://doi.org/10.1385/1592591698
Williams, A. P., Cockburn, J. E. (1988). Cromatography and Analysis, 1. 9–11.
Letöltések
Megjelent
Folyóirat szám
Rovat
License
Copyright (c) 2005 Csapó János, Lóki Katalin, Csapóné Kiss Zsuzsanna, Albert Csilla
This work is licensed under a Creative Commons Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 International License.
