Fajazonosítás hús- és sajttermékekből PCR-egyszálú DNS konformáció polimorfizmus (PCR-SSCP) és DNS szekvenálás alkalmazásával

Szerzők

  • Csikós Ádám University of Debrecen, Institute of Animal Science, Biotechnology and Nature Conservation, 4032 Debrecen, Böszörményi str. 138.
  • Tisza Ákos University of Debrecen, Institute of Animal Science, Biotechnology and Nature Conservation, 4032 Debrecen, Böszörményi str. 138.
  • Simon Ádám University of Debrecen, Institute of Animal Science, Biotechnology and Nature Conservation, 4032 Debrecen, Böszörményi str. 138.
  • Gulyás Gabriella University of Debrecen, Institute of Animal Science, Biotechnology and Nature Conservation, 4032 Debrecen, Böszörményi str. 138.
  • Jávor András University of Debrecen, Institute of Animal Science, Biotechnology and Nature Conservation, 4032 Debrecen, Böszörményi str. 138.
  • Czeglédi Levente University of Debrecen, Institute of Animal Science, Biotechnology and Nature Conservation, 4032 Debrecen, Böszörményi str. 138.

DOI:

https://doi.org/10.17205/SZIE.AWETH.2015.2.78

Kulcsszavak:

fajazonosítás, PCR-SSCP, DNS szekvenálás

Absztrakt

Az elmúlt években az élelmiszerekből molekuláris biológiai módszerekkel történő fajazonosítás kiemelkedő fontosságúvá vált. Az Európai Unió területén bekövetkező élelemiszerhamisítási botrányok világítottak rá ezeknek a módszereknek a fontosságára.

PCR-SSCP és DNS szekvenálás alkalmazásával vizsgáltunk kereskedelmi forgalomból származó élelmiszereket. Ezekből a termékekből izoláltunk DNS-t, majd a mitokondriális 12S rRNS gén 278 bp hosszúságú szakaszát szaporítottuk fel. Az amplikonokat magas hőmérsékleten és formamid jelenlétében egyszálúsítottuk, majd nem denaturáló közegben, eltérő konformációjuk alapján poliakrilamid gélen választottuk el. A gélen lévő DNS sávokat ezüstfestéssel tettük láthatóvá. A vizsgált 12 hús- és 6 sajttermék esetében a PCR-SSCP módszer elvégzése után DNS szekvenálást is végeztettünk.

A PCR-SSCP vizsgálat alapján megállapítottuk, hogy 12 hústermékből 6, 6 sajttermékből 3 tartalmazott a címkézésen nem jelölt fajt. Ezeket az eredményeket a DNS szekvenálás is megerősítette. Az eredmények a PCR-SSCP módszer alkalmazhatóságát bizonyítják. Továbbá a PCR-SSCP módszer alacsonyabb költségekkel jár, mint a DNS szekvenálás vagy a real-time PCR technika alkalmazása, így egy könnyebb és olcsóbb alternatívát teremt az élelmiszerekből végzett fajazonosítás végrehajtására.

Információk a szerzőről

  • Csikós Ádám, University of Debrecen, Institute of Animal Science, Biotechnology and Nature Conservation, 4032 Debrecen, Böszörményi str. 138.

    levelezőszerző
    csikos@agr.unideb.hu

Hivatkozások

Chou, C. C., Lin, S. P., Lee, K. M., Hsu, C. T., Vickroy, T. W., Zen, J. M. (2007): Fast differentiation of meats from fifteen animal species by liquid chromatography with electrochemical detection using copper nanoparticle plated electrodes. Journal of Chromatography B, 846(1–2) 230–239. https://doi.org/10.1016/j.jchromb.2006.09.006

Csikos, A., Hodzic, A., Pasic-Juhas, E., Javor, A., Hrković-Porobija, A., Goletic, T., Gulyas, G., Czegledi, L. Applicability and sensitivity of PCR SSCP method for milk species identification in cheese. Acta Alimentaria, 45(1) 69–76. (Accepted manuscript; In press - 2016) https://doi.org/10.1556/066.2016.45.1.9

Dalmasso, A., Fontanella, E., Piatti, P., Civera, T., Rosati, S., Bottero, M. (2004): A multiplex PCR assay for the identification of animal species in feedstuffs. Molecular and Cellular Probes, 18(2) 81–87. https://doi.org/10.1016/j.mcp.2003.09.006

De, S., Brahma, B., Polley, S., Mukherjee, A., Banerjee, D., Gohaina, M., Singh, K.P., Singh, R., Datta, T.K., Goswami, S.L. (2011): Simplex and duplex PCR assays for species specific identification of cattle and buffalo milk and cheese. Food Control, 22(5) 690–696. https://doi.org/10.1016/j.foodcont.2010.09.026

Di Pinto, A., Forte, V. T., Conversano, M. C., Tantillo, G. M. (2005): Duplex polymerase chain reaction for detection of pork meat in horse meat fresh sausages from Italian retail sources. Food Control, 16(5) 391–394. https://doi.org/10.1016/j.foodcont.2004.04.004

Galvani, M., Hamdan, M., Righetti, P. G. (2001): Two-dimensional gel electrophoresis/matrixassisted laser desorption/ionization mass spectrometry of commercial bovine milk. Rapid Communications in Mass Spectrometry, 15(4) 258–264. https://doi.org/10.1002/rcm.220

García-Canas, V., González, R., Cifuentes, A. (2004): The combined use of molecular techniques and capillary electrophoresis in food analysis. Trends in Analytical Chemistry, 23(9) 637–643. https://doi.org/10.1016/j.trac.2004.07.005

Hayashi, K. (1999): Recent enhancements in SSCP. Genetic Analysis: Biomolecular Engineering, 14(5–6) 193–196. https://doi.org/10.1016/S1050-3862(98)00017-5

Hurley, I. P., Coleman, R. C., Ireland, H. E., Williams, J. H. H. (2004): Measurement of bovine IgG by indirect competitive ELISA as a means of detecting milk adulteration. International Journal of Food Science and Technology, 39(8) 873–878. https://doi.org/10.1111/j.1365-2621.2004.00861.x

Kitpipit, T., Sittichan, K., Thanakiatkrai, P. (2014): Direct-multiplex PCR assay for meat species identification in food products. Food Chemistry, 163. 77–82. https://doi.org/10.1016/j.foodchem.2014.04.062

Kocher, T. D., Thomas, W. K., Mayer, A., Edwards, S. V., Pääbo, S., Villablanca, F. X. (1989): Dynamics of mitochondrial DNA evolution in animals: Amplification and sequencing with conserved primers. Proceedings of the National Academy of Sciences USA, 86(16) 6196–6200. https://doi.org/10.1073/pnas.86.16.6196

Lau, C. H., Drinkwater, R. D., Yusoff, K., Tan, S. G., Hetzel, D. J. S., Barker, J. S. F. (1998): Genetic diversity of Asian water buffalo (Bubalus bubalis): Mitochondrial DNA D-loop and cytochrome b sequence variation. Animal Genetics, 29(4) 253–264. https://doi.org/10.1046/j.1365-2052.1998.00309.x

Matsunaga, T., Chikuni, K., Tanabe, R., Muroya, S., Shibata, K., Yamada, J., Shinmura, Y. (1999): A quick and simple method for the identification of meat species and meat products by PCR assay. Meat Science, 51(2) 143–148. https://doi.org/10.1016/S0309-1740(98)00112-0

Mayer, H. K., Heidler, D., Rockenbauer, C. (1997): Determination of the percentages of cows', ewes' and goats' milk in cheese by isoelectric focusing and cation-exchange HPLC of γ- and para-κ-caseins. International Dairy Journal, 7(10) 619–628. https://doi.org/10.1016/S0958-6946(97)00064-2

Merill, C. R., Goldman, D., Van Keuren, M. L. (1984): Gel protein stains: Silver stains. In Methods and Enzimology, 104. 441–447. https://doi.org/10.1016/S0076-6879(84)04111-2

Peters, H., Robinson, P. N. (2010): Temperature and Denaturing Gradient Gel Electrophoresis. In: Patrinos, G. P., Ansorge,W. (ed.)Molecular Diagnostics. Second Edition, Elsevier. pp 75–86. https://doi.org/10.1016/B978-0-12-374537-8.00006-7

Rabilloud, T. (2002): Two-dimensional gel electrophoresis in proteomics: Old, old fashioned, but it still climbs up the mountains. Proteomics, 2(1) 3–10. https://doi.org/10.1002/1615-9861(200201)2:1<3::AID-PROT3>3.0.CO;2-R

Richter, W., Krause, I., Graf, C., Sperrer, I., Schwarzer, C., Klostermeyer, H. (1997): An indirect competetive ELISA for the detection of cows’ milk and caseinate in goats’ and ewes’ milk and cheese using polyclonal antibodies against bovine γ-caseins. Zeitschrift für Lebensmittel-Untersuchung und – Forschung A, 204. 21–26. https://doi.org/10.1007/s002170050030

Letöltések

Megjelent

2015-12-22

Folyóirat szám

Évf. 11 Szám 2 (2015): AWETH

Rovat

Cikkek

License

Copyright (c) 2015 Csikós Ádám, Tisza Ákos, Simon Ádám, Gulyás Gabriella, Jávor András, Czeglédi Levente

Creative Commons License

This work is licensed under a Creative Commons Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 International License.

Hogyan kell idézni

Fajazonosítás hús- és sajttermékekből PCR-egyszálú DNS konformáció polimorfizmus (PCR-SSCP) és DNS szekvenálás alkalmazásával. (2015). Animal Welfare, Etológia és Tartástechnológia (AWETH), 11(2), 78-83. https://doi.org/10.17205/SZIE.AWETH.2015.2.78

Hasonló cikkek

11-20 a 36-ból/ből

You may also Haladó hasonlósági keresés indítása for this article.

Ugyanannak a szerző(k)nek a legtöbbet olvasott cikkei