MTT (3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difenil tetrazólium-bromid) kolorimetriás módszer adaptálása Lactobacillus törzsek vizsgálatához
Kulcsszavak:
MTT, Lactobacillus, enzimaktivitás, kolorimetriaAbsztrakt
A tejsavbaktériumok és azon belül a Lactobacillus törzsek széles körben megtalálhatóak a természetben és az emberi béltraktus mikroflórájának is fontos tagjai. Számos kutatás foglalkozik ezen mikroorganizmusok számunkra előnyös tulajdonságaival, amelyek egyre világosabbá teszik, hogy nélkülük elképzelhetetlen lenne az életünk. Ezért is fontos, hogy minél több információval rendelkezzünk ezen nélkülözhetetlen mikroorganizmusokról. Munkánk során egy eredetileg humán sejtek vizsgálatához alkalmas kolorimetriás módszert adaptáltunk és optimalizáltunk az általunk vizsgált tesztmikroorganizmusok enzimaktivitásának méréséhez. Az irodalomban közölt módszer módosításával, paramétereinek beállításával egy gyors eljárást kaptunk, amelynek segítségével kevesebb mint négy óra alatt közvetlenül kimutatható a baktérium sejtek enzimaktivitása és közvetve azok sejtszáma is. Az adaptáció során megállapítottuk az optimális paramétereket (baktériumsejt koncentrációt, MTT koncentrációt, inkubációs időt, pH hatást), amelyek esetén szoros korreláció áll fenn a sejtszám és a keletkezett formazán koncentráció között. Méréseink során azt tapasztaltuk, hogy a Lactobacillus törzsek enzimaktivitását nagymértékben befolyásolja azok pillanatnyi szaporodási fázisa, a táptalaj minősége, továbbá a törzsek között is jelentős különbség figyelhető meg.
Hivatkozások
Altman, F.P. (1976): Tetrazolium salts and Formazans. Progress in Histochemistry and Cytochemistry, 9(3):1-51. https://doi.org/10.1016/s0079-6336(76)80015-0
Deák, T. (2005): A mikrobavilág molekuláris szemlélete. Élelmezési Ipar, 59(4):105-111.
Deák, T. (2006a): Élelmiszer-mikrobiológia. Mezőgazda Kiadó, Budapest.
Deák, T. (2006b): Mikrobiológiai vizsgáló módszerek. Budapesti Corvinus Egyetem, Mezőgazda Kiadó, Budapest.
Denizot, F., Lang, R. (1986): Rapid colorimetric assay for cell growth and survival Modifications to the tetrazolium dye procedure giving improved sensitivity and reliability. Journal of lmmunological Methods, 89:271-277. https://doi.org/10.1016/0022-1759(86)90368-6
Mosmann, T. (1983): Rapid Colorimetric assay for cellular growth and survival: Application to proliferation and cytotoxicity assays. Journal of lmmunological Methods, 65:55-63. https://doi.org/10.1016/0022-1759(83)90303-4
Peng, L., Wang, B., Ren, P. (2005): Reduction of MTT by flavonoids in the absence of cells. Colloids and Surfaces B: Biointerfaces, 45:108-111. https://doi.org/10.1016/j.colsurfb.2005.07.014
Twentyman, P.R., Luscombe, M. (1987): A study of some variables in a tetrazolium dye (MTT) based assay for cell growth and chemosensitivity. British Journal of Cancer, 56:279-285. https://doi.org/10.1038/bjc.1987.190
Wang, F., Cao, L., Hu, S. (2007): A rapid and accurate 3- (4,5-dimethyl thiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide colorimetric assay for quantification of bacteriocins with nisin as an example. Journal of Zhejiang University SCIENCE B, 8(8):549-554. https://doi.org/10.1631/jzus.2007.b0549
Wang, H., Cheng, H., Wang, F., Wei, D., Wang X. (2010): An improved 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide (MTT) reduction assay for evaluating the viability of Escherichia coli cells. Journal of Microbiological Methods, 82:330-333. https://doi.org/10.1016/j.mimet.2010.06.014
Letöltések
Megjelent
Folyóirat szám
Rovat
License
Copyright (c) 2022 Hegyi Ferenc, Perjéssy Judit, Zalán Zsolt
This work is licensed under a Creative Commons Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 International License.
