Egy-sejt PCR beállítása sertésen preimplantációs genetikai diagnózis céljából - Fábián, Renáta; Pintér, Tímea; Magyar, Andrea; Bodó, Szilárd (Animal Welfare, Etológia és Tartástechnológia (AWETH), 2018)
Az utóbbi évtizedben az új reprodukciós technikák fejlesztésének és alkalmazásának hatására jelentősen megemelkedett a sertés ágazat termelékenysége. A preimplantációs genetikai diagnózis (PGD) és embriótranszfer segítségével meghatározott ivarú utódokból álló almok állíthatók elő. Az embriókon végzett biopszia révén kinyert sejtek ivarának meghatározása után a kívánt nemű embriók ültethetők recipiens állatokba. Kísérleteinkben egy sertés PGD módszert kívántunk kifejleszteni in vitro létrehozott embriókból embrióbiopsziával kinyert sejteken.Munkánk során az ivarspecifikus PCR-hez pozitív kontrollként a mindkét nemre jellemző sertés mitokondriális 12S rRNS génszekvenciát választottuk, míg az Y kromoszóma kimutatására a sertés hím-specifikus ismétlődő szekvenciát alkalmaztuk a duplex PCR során. Vágóhídról származó petefészkekből kinyert petesejteket használtunk a PCR beállításához, hogy elérjük az embrió ivarának meghatározáshoz szükséges detektálási érzékenységet (6pg/μl DNS). A keletkezett PCR termékek 2%-os agaróz gélen futtatva jól elkülöníthetőek: nőstény esetében egy, hímek esetében két sáv detektálható. A sikeres beállítást követően a PGD módszereként in vitro fertilizációval előállított 8-sejtes embriókat biopsziáztunk és egy-sejt PCR segítségével megállapítottuk a nemüket.
Keywords: PGD; ivarmeghatározás; egy-sejt PCR